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EmporeTM膜式固相萃取柱萃取尿液中四氫大麻酚代謝物并以GC-MS定量

更新時間:2022-07-11       點擊次數(shù):2722
 摘要:

在(-)-11-nor-9-羧基-9-四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)的氣相色譜-質(zhì)譜分析中,評估了EmporeTM固相萃取柱(4215SD-C18的樣品制備。固相萃取柱性能由測定的回收率決定?;厥章史秶?/span>78.7-110.1%。標準曲線線性范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時,相關系數(shù)R2=0.9998。

 

關鍵詞:

四氫大麻酚,THCCOOH,外標法,GC-MS 

 

 

前言

美國CDS公司膜式固相萃取 (SPE)技術,以其有機溶劑消耗、結果重現(xiàn)性高、樣品制備的通量高、提取物更清潔,可減少 GC 系統(tǒng)的污染以及自動化提取等優(yōu)勢[1],廣泛應用于藥物檢測領域[2,3]。本實驗使用美國CDS公司膜式固相萃取柱(EmporeTM,4215SD-C18提取尿液中△9-四氫大麻酚(THC,大麻)代謝物(-)11-nor-9-羧基-9-四氫大麻酚 (THCCOOH),并以GC-MS分析定量

1, 實驗過程

1.1 儀器與試劑 

所有試劑均為分析純或更高。

THCCOOH(100.0±0.6 μg/mL)和 MSTFA + 1% TMCS硅烷化試劑,均購自西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司;

人工尿液(PH:5.7-500mL),購自福州飛凈生物科技有限公司;

乙酸乙酯(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司

甲醇(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司

正己烷(色譜純),購自賽默飛世爾科技(中國)有限公司

EmporeTM 膜式固相萃取柱:4215SD-C18,購自美國CDS公司;

氣質(zhì)聯(lián)用儀:7890B-5977B安捷倫氣質(zhì)聯(lián)用儀,Agilent公司。 

1.2 工作液配制 

THCCOOH標準使用溶液:0.1 μg/mL,溶劑體系為甲醇;

1.3 實驗部分

1.3.1 樣品制備

取1215mL離心,分別裝入3mL尿液樣品,加入不同體積的THCCOOH標準使用液(加標量分別3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng),每個標點進行平行兩次制備。然后加入300μL氫氧化鉀溶液(10mol/L),在60水浴環(huán)境下水解15min取出冷卻至室溫,再以冰醋酸調(diào)節(jié)pH到4.0~4.5。

EmporeTM固相萃取柱(C18, 7mm/3mL)預先用150μL甲醇進行活化,后進行上樣(在重力作用下使樣品自然流下),上樣結束后用750μL甲醇-水溶液(5050)淋洗萃取柱,在690mmHg真空狀態(tài)下干燥5min,最后用800μL正己烷-乙酸乙酯溶液(7525)進行洗脫。

1.3.2 凈化與濃縮

洗脫液經(jīng)40氮吹至干,然后加入100μL衍生試劑(MSTFA+1%TMCS),在60℃水浴條件下衍生20min,轉(zhuǎn)移至樣品瓶待 GC-MS分析。

1.3.3 標準曲線配制

取6個20mL樣品瓶,分別加入不同體積THCCOOH標準使用溶液,加入THCCOOH質(zhì)量分別為3ng、15ng、30ng、60ng、150ng、300ng,參照與加標樣品制備同等濃縮、衍生條件進行前處理,待GC-MS分析。

1.3.4 GC-MS分析

進樣口溫度:290;進樣模式:不分流進樣;流速:1.0mL/min;

柱溫:100保持1min,然后以30/min的速度升至300,保持5min。

表1 THCCOOH定量、定性離子

化合物

定量、定性離子

保留時間(min)

THCCOOH

371/473/488

12.158

 

2, 實驗結果(外標法) 

實驗發(fā)現(xiàn):標準曲線第一個點(3ng)信噪比較低,難以準確積分。標準曲線第五個點(150ng)結果明顯偏低,為實驗操作衍生化失誤引進誤差。 

 

 圖1標準曲線校準點重疊色譜圖

 

圖2
 標準曲線

 

3,結果與討論

本次實驗展示了一種使用CDS-EmporeTM 固相萃取柱(215SD-C18),對尿液中四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)進行富集提取的簡單有效方法。實驗中,尿液加標樣品經(jīng)水解、固相萃取凈化、濃縮以及衍生等前處理步驟后,經(jīng)GC-MS分析得到不同濃度下四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)加標回收率,回收率范圍在78.7-110.1%,結果較好。標準曲線濃度范圍在0.15μg/mL~3.0μg/mL時,相關系數(shù)R2=0.9998,具有較好線性。實驗表明,CDS-EmporeTM 固相萃取柱(215SD-C18)適用于尿液中四氫大麻酚代謝物(THCCOOH)的萃取凈化。該方法具有操作簡便,線性范圍寬,穩(wěn)定性高等優(yōu)點,并在尿液量少,分析物濃度較低時顯示出優(yōu)異的回收率。

 

4,參考文獻

1,Jasbir Singh and Linda Johnson,Solid-Phase Extraction of THC Metabolite from Urine using the Empore Disk Cartridge Prior to Analysis by GC-MS,Journal of Analytical Toxicology, Vol. 21, September 1997。

2,R.H. Liu and B.A. Goldberger. Handbook of Workplace Drug Testing. AACC Press, Washington, DC, 1995.

3, A.H.B. Wu, N. Liu, Y.-J. Cho, K.G. Johnson, and S.S. Wong. Extraction and simultaneous elution and derivatiztion of 11-nor-9- carboxy-9-tetrahydrocannabinol using Toxi-Lab SPEC prior to GC/MS analysis of urine, J. Anal. Toxicol. 17:215-17 (1993)

 

 

3 不同濃度加標樣品重疊色譜圖

 

2  加標回收率結果

序號

加標

回收率 %

均值 %

ng

1

2

1

15

82.2

96.4

89.3

2

30

101.8

109.4

105.6

3

60

89.2

78.7

83.9

4

150

93.1

101.3

97.2

5

300

91.4

110.1

100.7

注:因3ng標點信噪比偏低,在此不做數(shù)據(jù)統(tǒng)計

 

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